Главная



Иммунология и вакцинация

Фитогемагглютинин

Хотя слово «фитогемагглютинин» (ФГА) в буквальном смысле означает «растительный продукт, агглютинирующий красные кровяные клетки», под этим термином, если не оговаривается особо, обычно понимают вполне определенный лектин, выделенный из красной обыкновенной фасоли Phaseolus vulgaris. Из всех моносахаридов лучшим ингибитором связывания ФГА с лимфоцитами является N-ацетил-D-галактозамин. Большие по размеру олигосахариды, содержащие помимо N- ацетил-D-галактозамина коровую часть из остатков маннозы, предконцевую галактозу и концевую сиаловую кислоту, ингибируют связывание ФГА еще сильнее. Реакция связывания ФГА с клеточной поверхностью достигает положения равновесия за 30 мин при 22°С и протекает примерно с одинаковой эффективностью как с В-, так и с Т-лимфоцитами. Однако митоз наступает главным образом (хотя и не исключительно) в Т-лимфоцитах. Для получения эффекта необходимо, чтобы митоген контактировал с клеткой в течение нескольких часов, а количество занятых митогеном участков на поверхности клетки составляло бы только 3—10% от всех потенциально связывающих участков. Экспериментально показано, что молекулы ФГА, ковалентно сшитые с гранулами сефарозы, могут вызывать включение 3Н-тимидина в лимфоциты. Этот факт часто приводится в качестве доказательства, что для активации существенна сшивка молекул на клеточной поверхности и необязательно проникновение митогена в клетку. Однако очень трудно полностью исключить возможность того, что небольшое количество митогена, отцепившееся от сефарозы, в активном состоянии проникло в клетку и, прореагировав с какими-то внутренними элементами клеточного аппарата, запустило более поздние активационные процессы. Используя растворимые ФГА и Кон А, можно измерить количество митогена, оказавшегося внутри клетки, однако имеет ли это проникновение какое-либо значение для активации, до сих пор не известно.

С помощью хроматографии на карбоксиметил-сефадексе можно разделить исходный ФГА на фракцию с высокой гемагглютинирующей и низкой митоген- ной активностями (R-ФГА) и фракцию с низкой гемагглютинирующей, но высокой лейкоцит-агглютинирующей и митогенной активностями (L-ФГА). L-ФГА состоит из четырех связанных нековалентными связями идентичных «α-субъединиц» с мол. массой 34 кДа каждая. Имеющий аналогичную структуру R-ФГА построен из четырех «α- субъединиц». L- и R-ФГА не ассоциированы друг с другом. Анализ аминокислотных последовательностей α- и β-субъединиц свидетельствует о том, что разница в связывающей способности L- и R-ФГА, по-видимому, определяется различиями в очень ограниченных участках, поскольку последовательности α- и β-субъединиц в значительной степени идентичны. Лектины из некоторых других бобовых (чечевица, горох, соя, арахис, кормовые бобы) имеют похожее субъединичное строение и аминокислотный состав, хотя и отличаются по специфичности связывания. По-видимому, различия в их аминокислотной последовательности в основном касаются участков связывания. С помощью метода кругового дихроизма было показано, что для лектинов из бобовых характерна β-структура т. е. их полипептидные цепи образуют при помощи водородных связей антипараллельные петли, подобно тому как это имеет место в доменах иммуноглобулинов. Можно надеяться, что результаты рентгеноструктурного анализа ФГА появятся в ближайшие несколько лет, поскольку кристаллы ФГА уже получены. Для солюбилизации и проявления активности ФГА требуются Са2+ и Mg2+. В присутствии этих ионов повышается, кроме того, стабильность ФГА при кислых рН.