Главная



Иммунология и вакцинация

Разделение при помощи лектинов

До 1980 г. в литературе имелось всего несколько сообщений об использовании лектинов для разделения лимфоцитов, причем речь идет в большинстве случаев об агглютинине из земляного ореха. Наиболее широко применяются два метода:

а) агглютинация части лимфоцитов путем инкубации с лектином, отделение агглютинированных клеток центрифугированием;

б) аффинная хроматография на колонках с лектинами. Связанные клетки могут быть элюированы с колонки с лектинами раствором углевода, по отношению к которому лектин специфичен.

Материалы и оборудование. Для работы необходимы: суспензия клеток, лектины (например, агглютинин земляного ореха), центрифуга, седиментационная камера, среда для клеток, сыворотка эмбрионов коров, галактоза или другие углеводы, соответствующие специфичности лектинов.

Агглютинация тимоцитов мыши агглютинином земляного ореха

Тимоциты (6-8Х108/мл) смешивают с равным объемом агглютинина земляного ореха (1 мг/мл ФСБ), инкубируют 10 минут при комнатной температуре. Затем 1 мл клеток (3-4Х108/мл) наслаивают на 30 мл клеток 20% сыворотки эмбрионов коров в ФСБ. В качестве седиментационной камеры можно использовать высокий узкий цилиндр. Через 30 минут после нанесения пипеткой или насосом отбирают верхние 15 мл. Обе фракции клеток собирают центрифугированием, затем обрабатывают 0,25 М галактозой в ФСБ в течение 10 мин, периодически осторожно встряхивая или засасывая раствор пипеткой. После обработки клетки отмывают и готовят из них суспензию необходимой концентрации.

Оценка метода

PNA (аббревиатура от англ. pea nut agglutinin), агглютинин земляного ореха (Arachis hypogaea), представляет собой наиболее хорошо изученный лектин. PNA связывает незрелые тимоциты мыши.

SBA (аббревиатура от англ. soia bean agglutinin), агглютинин соевых бобов (Glycine шах), обладает специфичностью в отношении В-лимфоцитов мыши.

VFL (аббревиатура от англ. Vicia-faba-Lektin), лектин из вики (Vicia faba), реагирует с цитотокси-ческими Т-лимфоцитами человека, но не с К- или NK-клетками.

WGA (аббревиатура от англ. «wheat germ agglutinin»), агглютинин зародышей пшеницы (Triticum vulgare), агглютинирует часть лимфоцитов мыши, но до настоящего времени не нашел применения в разделении лимфоцитов, различающихся по функциональной активности.

Данные о других выделенных к настоящему времени лектинах настолько неопределенны, что этот вопрос здесь не будет обсуждаться. Лектины не дают полного разделения клеток; точные данные в литературе по этому вопросу отсутствуют. Однако, вероятно, использование лектинов окажется хорошим вспомогательным средством в фракционировании клеток.