Главная



Иммунология и вакцинация

Оценка антителообразования

Культуры инкубируют в стационарной газовой фазе в течение 4 дней при 37 °С без встряхивания и добавления питательных веществ. После извлечения чашек с культурой из инкубатора работу проводят в нестерильных условиях. Культивируемые клетки, образующие отчетливо видимый «газон» на дне чашки, соскабливают с поверхности стекла. Для этого используют стеклянную палочку, на нижний конец которой надет кусок пластмассового шланга, край которого выступает примерно на 1 мм. Суспензию клеток переносят в центрифужную пробирку (10 мл) и центрифугируют 5 мин при 150 g. После удаления надосадочной жидкости осадок клеток суспендируют в 1—2 мл охлажденного раствора Хенкса и хранят в ледяной бане.

Определение жизнеспособности выросших клеток проводят в камере Burner при помощи раствора трипанового синего. Подсчет антителообразующих клеток (АОК) производят при помощи методов прямого и непрямого локального гемолиза в геле (см. раздел "Метод локального гемолиза"). С клетками из каждой чашки проводят по меньшей мере два параллельных определения. Интенсивность антителообразования определяют как количество антителообразующих клеток на каждые 10б жизнеспособных клеток.