Главная



Иммунология и вакцинация

Реакция бласттрансформации лимфоцитов

Реакция бласттрансформации лимфоцитов. Методика
Реакция бласттрансформации лимфоцитов. Оценка метода

Активация лимфоцитов под воздействием ФГА послужила в 1960 г. толчком для разработки метода бласттрансформации, при помощи которого многочисленные исследователи оценивают in vitro клеточный иммунитет, в том числе реакции В-клеток. Методическая сложность реакции бласттрансформации лимфоцитов породила самые разнообразные модификации, которые в свою очередь затрудняют интерпретацию результатов, полученных разными исследователями. Контакт лимфоцитов, несущих соответствующий рецептор с антигеном или митогеном, вызывает так называемую реакцию бласттрансформации. В соответствии с различными биологическими процессами, протекающими в трансформированных клетках, известно много физико-химических и биологических методов. Рекомендуется использовать вариант реакции бласттрансформации лимфоцитов, основанный на включении меченного тимидина. Измерение основано на вторичном вовлечении первично-неактивированных лимфоцитов в реакцию вследствие продукции митогенных факторов (интерлейкины). Этим объясняется причина продолжительного времени культивирования (ожидание эффекта усиления). Тест позволяет исследовать 6 основных моментов:

— определение специфической сенсибилизации пациентов к чужеродным антигенам или аутоантигенам, соответствующий антиген исследуют in vitro;

— вследствие внесения митогенов in vitro клетки подвергаются неспецифической стимуляции; известно довольно много селективно действующих Т- или В-митогенов; митогены доказывают способность лимфоцитов к стимуляции; до настоящего времени не ясно, какие субпопуляции стимулируются теми или иными митогенами;

— обычная реактивность лимфоцитов может изменяться под воздействием внешних факторов (условия культивирования или добавки);

— если к моменту отбора пробы крови иммунная система испытывает нагрузки (инфекция, отторжение трансплантата), то большое число лимфоцитов оказываются реактивными, т. е., помимо прочего, способными к бласттрансформации in vivo. Если провести немедленное мечение клеток, отмечается повышенное включение метки в лимфоциты. Этот феномен не только указывает на острый процесс, но также может существенно искажать результаты некоторых тестов;

— пролиферативный ответ на активаторы лимфоцитов можно использовать в качестве индикаторной системы для изучения регуляции иммунитета. Для этого можно осуществлять совместное культивирование в аутологичных и аллогенных системах. В последнем случае исследуемая популяция клеток рассматривается как индикаторная (респондеры) или как модулирующая (реактанты);

— определение первичной реакции на аллогенные клетки в форме СКЛ (см. раздел «Смешанная культура лимфоцитов»).