Главная



Иммунология и вакцинация

Цитотоксические лимфоциты. Расчет

Расчет индекса цитотоксичности возможен для самых различных модификаций экспериментов. Измеряют радиоактивность надосадочной фракции и осадка.

ZIM — радиоактивность надосадочной. фракции клеток-мишеней, инкубированных с сенсибилизированными лимфоцитами;
ZKO — то же самое, но с контрольными лимфоцитами;
ZIM — радиоактивность нелизированных клеток-мишеней, инкубированных с сенсибилизированными лимфоцитами;
ZKO — то же самое, но с контрольными лимфоцитами;
ZGES — общая радиоактивность пробы (осадок и надосадочная фракция);
ZMAX — максимальная радиоактивность надосадочной фракции после обработки клеток тритоном Х-100;
ZMIX — минимальная остаточная радиоактивность клеток-мишеней после обработки тритоном Х-100;
ZSR — спонтанное высвобождение радиоактивного изотопа (клетки = мишени + среда).

А: значение цитотоксичности (ZT) можно отнести к общей радиоактивности и выразить в виде % увеличения (надосадочная фракция) или уменьшения (осадок).

      (уравнение 1)

    (уравнение 2)

Оба значения идентичны.

Б: если исходить из цитотоксического индекса (ZI)

     (уравнение 3)

то в соответствии с преобразованием

% снижения или увеличения радиоактивности выражается в форме

     (уравнение 4)

     (уравнение 5)

Уравнения 4 и 5 дают одинаковые результаты. Уравнение 4 пригодно для визуальной оценки микроцитотоксического теста, когда вместо числа распадов учитывают число клеток. В: если учесть, что не вся радиоактивность клеток-мишеней высвобождается под воздействием эффекторных клеток, а только некоторая величина ZMAX (связанной с клетками остается ZMIN), то

     (Уравнение 6)

    (уравнение 7)

Уравнения б и 7 также дают одинаковые результаты.

Данные, получаемые при использовании различных формул, отличаются друг от друга. Различие зависит в первую очередь от величины ZKO (ZKO) и ZMAX (ZMIN). При ZGES >> ZKO уравнение 5 переходит в уравнение 1, при ZGES = ~ ZMAX уравнение 6 переходит в уравнение 5. При высоких значениях Zmax и низких значениях радиоактивности уравнения 1,5 и 6 дают близкие результаты; высокий % спонтанного высвобождения метки с контрольными лимфоцитами приводит к сходным данным, получаемым по формулам 5 и 6. Эти данные больше тех, которые рассчитываются по уравнению 1. Часто для подсчета ZT используют не значение радиоактивности, получаемое под воздействием контрольных клеток, а значение, получаемое при спонтанном процессе (ZSR). Проблемы возникают в случае постановки обоих контролей и если ZKO > ZSR. Это имеет место при культивировании in vitro, когда ZT контрольных клеток доходит до 15%. В каждом случае приходится приводить сведения относительно методов расчета, использованных в цитотоксической реакции.