Главная



Иммунология и вакцинация

Цитотоксические лимфоциты

Опосредованная клетками цитотоксичность
Цитотоксические лимфоциты после аллогенной иммунизации
Цитотоксические лимфоциты мышей с опухолями в сингенной системе
Цитотоксические клетки после аллогенной стимуляции
Цитотоксические лимфоциты. Расчет

Цитотоксический тест используется для определения антигенов клеточных мембран, поверхностных маркеров, антител и эффекторных клеток. Проведение теста основано на разрушении клеток-мишеней под непосредственным воздействием лимфоцитов или при помощи антител, например, это имеет место в торможении роста монослоя культур клеток. Эффект наблюдают визуально или по переходу радиоактивной метки. Как эффекторные клетки функционируют цитотксические Т-клетки (Тс), К-клетки, цитотоксические макрофаги и индуцированные лектинами киллеры.

Тс-клетки являются продуктами иммунного ответа, их рецептор специфичен по отношению к индуцирующему антигены. К-клетки действуют совместно с антителами (см. раздел «Антителозависимая клеточная цитотоксичность»). Эту функцию могут выполнять различные клетки, но никогда В-клетки. Соединение лимфоцита с клеткой-мишенью, адсорбировавшей антитела, происходит по Fc-рецептору. К- и NК-клетки иммунологически неспецифичны и не являются продуктами иммунной реакции. Эти клетки обладают рецепторами к опухолевым клеткам, для своей деятельности они не нуждаются в наличии антител. К- и NК-клетки ввиду отсутствия Т- и В-маркеров также называют «нуль»-клетками. Не исключено, что они являются предшественниками Т-клеток.

Оба вида клеток различают по их способности разрушать разные клетки-мишени. Индукция эффекторных клеток происходит in vivo и in vitro, значение клонирования клеток постоянно возрастает. В качестве клеток-мишеней используют свежеприготовленные клетки (тимоциты, спленоциты, эритроциты, макрофаги, опухолевые клетки), а также клетки некоторых линий и стимулированные митогенами спленоциты.

Для радиоактивного мечения используется целый ряд изотопов. Радиоактивное вещество должно равномерно распределяться по клетке независимо от метаболической активности и клеточного цикла, высвобождаться при необратимом повреждении клетки-мишени, должно быть достаточно активным и не реутилизироваться. Интенсивность лизиса зависит также от числа эффекторных клеток, клеток-мишеней, от соотношения этих двух типов и даже от объема смеси и геометрии реакционного сосуда. Чаще используют высвобождение метки из клеток-мишеней, но находит применение и маркировка оставшихся жизнеспособными клеток-мишеней. Тс-, К-и NK-клетки обладают сходными механизмами лизирования клеток-мишеней. Синтезированные Т-клетками антигенспецифические мембранные рецепторы способствуют контакту Тс-клеток с клетками-мишениями за счет взаимодействия микрофиламентов обоих типов клеток. На процесс связывания оказывают влияние двухвалентные ионы (Mg2+ и Са2+), метаболизм и клеточный цикл. Этот эффект, вероятно, связан с изменением проницаемости мембраны. Возможно, повреждение мембраны происходит изнутри клетки-мишени под воздействием внешнего сигнала эффекторной клетки. Один лимфоцит может реагировать со многими клетками-мишенями. Существует целый ряд методических сложностей, связанных с воспроизводимостью результатов, взаимосвязью определенных субпопуляций лимфоцитов с эффекторными клетками, подсчетом числа эффекторных клеток на высоте иммунного ответа и др., приведенных в соответствующих обзорах.