Главная



Иммунология и вакцинация

Применение метода иммунофлюоресценции в клинической иммунологии, обнаружение аутоантител

Важнейшей областью применения непрямого иммунофлюоресцентного анализа является обнаружение аутоантител (ААТ) в сыворотках пациентов с аутоиммунными заболеваниями. Во многих случаях этот метод занял прочное место в лабораторной диагностике, например, в определении антиядерного фактора (АЯФ), антимитохондриальиых антител (АМА), антител к щитовидной железе, антител при пузырчатке и пемфигоиде. Выбор антигенного субстрата для определения ААТ должен учитывать их специфичность (тканевую или органную). Поскольку многие разновидности аутоантител можно обнаруживать или исключать при помощи одного субстрата, часто применяют комбинации тканей различных органов, таких как печень, желудок, почки крыс или мышей, иногда с добавлением ткани щитовидной железы человека.

Иммунофлюоресцентный анализ применительно к обнаружению аутоантител имеет несомненные преимущества по сравнению с другими методами, а именно простота методики, малый расход времени и реагентов, высокая чувствительность и гибкость анализа, доступность коммерческих препаратов конъюгатов. Определяющим моментом анализа является дифференциация различных типов флюоресценции. Требуется большой опыт, чтобы обнаружить типичную флюоресценцию аутоантител в препарате. Гибкости анализа, т. е. возможности определять несколько разновидностей аутоантител при помощи одного антигенного субстрата, содержащего большое количество разных антигенов, сопутствует определенный недостаток; в частности, не всегда можно точно установить наличие искомого антигена или аутоантител в флюоресцирующем препарате.

Картина иммунофлюоресценции, характерная для различных аутоантител, описывается в литературе с учетом относительной интенсивности флюоресценции, при помощи микрофотографий или вербально; например, антиядерный фактор — как гомогенную, крапчатую, периферическую или нуклеолярную флюоресценцию. Такую информацию нельзя считать достаточной во всех случаях, поэтому возникает необходимость консультации с другими лабораториями, обмена позитивными сыворотками для получения сравнимых результатов и т. д. Хотя многие аутоантитела не обладают органной и видовой специфичностью, например антиядерный фактор, выбор подходящего субстрата имеет решающее значение, поскольку концентрация или доступность антигенов может быть различной у разных видов.

Сравнимость результатов можно обеспечить или использованием одинаковых субстратов, или сравнением чувствительности применяемых систем. При определении аутоантител следует делать различие между минимальным определяемым титром и титром, имеющим клиническое значение. Первый зависит от нежелательной флюоресценции в области расположения соответствующего антигена и сильно варьирует для различных аутоантител; например, для антиядерного фактора титр составляет 1:1, титр антител к гладкой мускулатуре— 1:40, а к скелетной мускулатуре 1:80. Клинически значимый титр зависит от распространенности типа аутоантител в группе здоровых или соответственно в группе страдающих определенным заболеванием пациентов. Поскольку этот титр зависит в значительной степени от вида применяемого антигенного субстрата, невозможно получить общезначимые выводы о диагностически важных титрах определенных групп больных.

До настоящего времени при использовании тест-систем, основанных на иммунофлюоресцентном анализе, приходится обследовать также большую контрольную группу пациентов. Данные об обнаружении аутоантител могут иметь важное клиническое значение как в диагностике, так и в решении вопроса о выборе терапии. Имеет значение только обнаружение присущих для данной нозологической формы аутоантител в диагностических титрах. Сыворотки рекомендуется с самого начала апробировать в тех разведениях, которые наиболее подходят для получения клинически значимых титров. Одновременно испытывают более высокое разведение (4-кратное) с тем, чтобы в случае положительного результата можно было точнее оценить необходимую степень разведения.